Affinity™ ECL kit (picogram) - #KF8001

Catalog:KF8001

Affinity™ ECL 키트 (피코그램) - #KF8001

카탈로그: KF8001

Source:Synthetic

출처: 합성

Application:WBIntroduction:Affinity®ECL Reagent(picogram)(KF001) is an enhanced chemiluminescent substrate 

specially developed for film imaging and is compatible with CCD imaging. The ECL Kit produces a strong signal 

with very low background for high sensitivity. Additionally, the ECL signal is long lasting, allowing repeated 

exposures without fear of losing data.RRID:AB_2843437

적용: WB

소개: Affinity® ECL 시약(피코그램)(KF001)은 필름 이미징을 위해 특별히 개발된 향상된 화학발광 기질로, 

CCD 이미징과 호환됩니다. 이 ECL 키트는 매우 낮은 배경에서 강한 신호를 생성하여 높은 민감도를 제공합니다. 

또한, ECL 신호는 오래 지속되어 데이터 손실에 대한 우려 없이 반복 노출이 가능합니다.

RRID: AB_2843437

Cite Format: Affinity Biosciences Cat# KF8001, RRID:AB_2843437.Format and storage:Store at RT sealed, 

avoid light preservation for one year.

인용 형식: Affinity Biosciences Cat# KF8001, RRID:AB_2843437

형식 및 보관: 실온에서 밀봉 상태로 보관하며, 빛을 피하여 1년 동안 보존하십시오.

Affinity® ECL Western Blotting Substrate (pg grade)

Affinity® ECL 웨스턴 블로팅 기질 (피코그램 등급)

Introduction

소개

The Affinity ECL Western Blotting Substrate is a highly sensitive nonradioactive, enhanced luminol-based 

chemiluminescent substrate for the detection of horseradish peroxidase (HRP) on immunoblots. Affinity 

ECL Western Blotting Substrate enables the detection of femtogram amounts of antigen and allows for 

easy detection of HRP using photographic or other imaging methods. Blots can be repeatedly exposed 

to X-ray film to obtain optimal results or stripped of the immunodetection reagents and re-probed. 

The special formulation of Affinity ECL Substrate makes it the ideal substitute for other ECL Substrate 

without the need for additional optimization of assay conditions.

Affinity ECL 웨스턴 블로팅 기질은 면역블롯에서 말굽 무스 타제(HRP)를 검출하기 위한 고감도 비방사성, 

향상된 루미놀 기반 화학발광 기질입니다. Affinity ECL 웨스턴 블로팅 기질은 항원의 펨토그램 수준을 검출할 수 

있으며, 촬영이나 기타 이미징 방법을 통해 HRP를 쉽게 검출할 수 있도록 합니다. 블롯은 최적의 결과를 얻기 

위해 X선 필름에 반복적으로 노출시키거나 면역검출 시약을 제거하고 재탐침할 수 있습니다. Affinity ECL 기질의 

특수한 조성은 다른 ECL 기질을 대체하기에 이상적이며, 분석 조건을 추가로 최적화할 필요가 없습니다.

Important Product Information 

중요 제품 정보   

• Affinity ECL Substrate requires more dilute antibody concentrations than those used with precipitating 

colorimetric HRP substrates. To optimize antibody concentrations, perform a systematic dot blot analysis.

• Affinity ECL 기질은 침전성 색도 HRP 기질에 사용된 것보다 더 희석된 항체 농도를 필요로 합니다. 

항체 농도를 최적화하려면 체계적인 도트 블롯 분석을 수행하십시오

• Empirical testing is essential to determine the appropriate blocking reagent for each Western blot system, 

as crossreactivity of the blocking reagent with antibodies causes nonspecific signal. Blocking buffer also 

affects system sensitivity.  

• 각 웨스턴 블롯 시스템에 적합한 차단 시약을 결정하기 위해 실험적 테스트가 필수적입니다.

 차단 시약이 항체와 교차반응하면 비특이적 신호가 발생할 수 있습니다. 

차단 완충액은 시스템 감도에도 영향을 미칩니다.

• Avoid using milk as a blocking reagent when using avidin/biotin systems because milk contains variable 

amounts of endogenous biotin, which causes high background signal.  

• 애비딘/바이오틴 시스템을 사용할 때 밀크를 차단 시약으로 사용하는 것을 피하십시오.

 밀크에는 가변적인 양의 내인성 바이오틴이 포함되어 있어 높은 배경 신호를 발생시킬 수 있습니다.

• Use sufficient volumes of wash buffer, blocking buffer, antibody solution and substrate working solution to 

cover blot and ensure that it never becomes dry. Using large blocking and wash buffer volumes minimizes 

nonspecific signal.

• 블롯을 덮고 건조하지 않도록 충분한 양의 세척 완충액, 차단 완충액, 항체 용액 및 기질 작업 용액을 

사용하십시오. 많은 양의 차단 및 세척 완충액을 사용하면 비특이적 신호를 최소화할 수 있습니다.

• For optimal results, use a shaking platform during incubation steps.

최적의 결과를 얻으려면, 인큐베이션 단계 동안 쉐이킹 플랫폼을 사용하십시오.

• Add Tween™-20 Detergent (final concentration of 0.05-0.1%) to the blocking buffer and all diluted antibody 

solutions to minimize nonspecific signal.

• 비특이적 신호를 최소화하기 위해 차단 완충액과 모든 희석된 항체 용액에 Tween™-20 계면활성제

(최종 농도 0.05-0.1%)를 추가하십시오.

• Do not use sodium azide as a preservative for buffers. Sodium azide is an inhibitor of HRP and could 

interfere with this system.

• 완충액 보존제로 sodium azide를 사용하지 마십시오. Sodium azide는 HRP의 억제제로 작용하여 

이 시스템에 간섭을 일으킬 수 있습니다.

• Do not handle membrane with bare hands. Always wear gloves or use clean forceps.

• 멤브레인을 맨손으로 다루지 마십시오. 항상 장갑을 착용하거나 깨끗한 집게를 사용하십시오.

• All equipment must be clean and free of foreign material. Metallic devices (e.g., scissors) must have no 

visible signs of rust. Rust may cause speckling and high background.

• 모든 장비는 깨끗하고 이물질이 없어야 합니다. 금속 장치(예: 가위)는 녹이 보이지 않아야 합니다.

 녹은 얼룩과 높은 배경 신호를 초래할 수 있습니다.

• Exposure to the sun or any other intense light can harm the substrate. For best results keep the substrate 

working solution in an amber bottle and avoid prolonged exposure to any intense light. Short-term exposure 

to typical laboratory lighting will not harm the working solution.  

• 기질은 태양광이나 기타 강한 빛에 노출되면 손상될 수 있습니다. 

최상의 결과를 얻으려면 기질 작업 용액을 갈색 병에 보관하고 강한 빛에 장시간 노출되지 않도록 하십시오. 

일반적인 실험실 조명에 단기간 노출되는 것은 작업 용액에 해를 끼치지 않습니다.

Procedure Summary  

절차 요약

Note: Antigen and antibody amounts may require optimization.  

참고: 항원과 항체의 양은 최적화가 필요할 수 있습니다.

1. Dilute the primary antibody to 5.0-0.5µg/mL.  

1.차 항체를 5.0-0.5µg/mL로 희석하십시오.

2. Dilute the secondary antibody to 1.0-0.067µg/mL.  

2.차 항체를 1.0-0.067µg/mL로 희석하십시오.

3. Mix Detection Reagents 1 and 2 at a 1:1 ratio and add it to the blot. Incubate blot for 1-30 minutes.

3.Detection Reagents 1과 2를 1:1 비율로 혼합하여 블롯에 추가하십시오. 블롯을 1-30분 동안 배양하십시오.

4. Drain excess reagent. Cover blot with a clear plastic sheet protector or clear plastic wrap.

4.과잉 시약을 제거하고 블롯을 투명 플라스틱 시트 보호대 또는 투명 플라스틱 랩으로 덮으십시오

5. Expose blot to X-ray film.

5.블롯을 X선 필름에 노출시키십시오.

Detailed Western Blotting Procedure 

상세한 웨스턴 블롯 절차

1. Remove blot from the transfer apparatus and block nonspecific sites with Blocking Reagent for 60 minutes 

at room temperature (RT) with shaking. If desired, block overnight at 2-8ºC without shaking.

1.전이 장치에서 블롯을 제거하고 Blocking Reagent로 비특이적 사이트를 차단합니다. 

실온(RT)에서 쉐이킹하며 60분 동안 배양하십시오. 원하는 경우, 쉐이킹 없이 2-8°C에서 밤새 차단하십시오.

2. Remove the Blocking Reagent and add the primary antibody working dilution. Incubate blot for 1 hour at 

RT with shaking or overnight at 2-8°C without shaking.

2.Blocking Reagent를 제거하고 1차 항체 작업 희석액을 추가합니다. 블롯을 실온에서 쉐이킹하며 

1시간 동안 배양하거나, 2-8°C에서 쉐이킹 없이 밤새 배양하십시오.

3. Briefly rinse membrane in Wash Buffer two times.

3.Wash Buffer로 멤브레인을 간단히 두 번 헹구십시오.

4. Wash membrane by suspending it in Wash Buffer and agitating for ≥ 5 minutes. Replace Wash Buffer at 

least 4-6 times. Increasing the Wash Buffer volume, the number of washes and wash duration may help 

minimize background signal.

4.Wash Buffer에 멤브레인을 담그고 ≥ 5분 동안 흔들어 씻으십시오. 

Wash Buffer를 최소 4-6회 교체하십시오. Wash Buffer 양을 증가시키고, 세척 횟수와 세척 시간을

 늘리면 배경 신호를 최소화하는 데 도움이 될 수 있습니다.

5. Incubate blot with the HRP-conjugate working dilution for 1 hour at RT with shaking.

5.HRP-conjugate 작업 희석액으로 블롯을 실온에서 쉐이킹하며 1시간 동안 배양하십시오.

6. Repeat Steps 3 and 4 to remove nonbound HRP-conjugate.

6.비결합된 HRP-conjugate를 제거하려면 3단계와 4단계를 반복하십시오.

Note: Membrane MUST be thoroughly washed after incubation with the HRP-conjugate.

참고: HRP-conjugate로 배양한 후 멤브레인을 철저히 세척해야 합니다.

7. Prepare the substrate working solution by mixing equal parts of Detection Reagents 1 and 2. Use 0.125mL 

Working Solution per cm2 of membrane.  

7.Detection Reagents 1과 2를 같은 비율로 혼합하여 기질 작업 용액을 준비하십시오. 멤브레인 1cm² 당 

0.125mL 작업 용액을 사용하십시오.

Note: For best results prepare working solution immediately before use. The working solution is stable for 

1 hour at RT.  

참고: 최상의 결과를 위해 작업 용액은 사용 직전에 준비하십시오. 작업 용액은 실온에서 1시간 동안 안정적입니다.

8. Incubate blot with working solution for 1 minute at RT.

8.블롯을 작업 용액으로 실온에서 1분 동안 배양하십시오.

9. Remove blot from working solution and place it in a plastic sheet protector or clear plastic wrap. Use an 

absorbent tissue to remove excess liquid and to carefully press out any bubbles from between the blot and 

the membrane protector.

9.블롯을 작업 용액에서 제거하고 플라스틱 시트 보호대 또는 투명 플라스틱 랩에 넣으십시오. 

흡수성 조직을 사용하여 과잉 액체를 제거하고 블롯과 멤브레인 보호대 사이의 공기를 조심스럽게 제거하십시오.

10. Place the protected membrane in a film cassette with the protein side facing up. Turn off all lights except 

those appropriate for X-ray film exposure (e.g., a red safelight).

10.보호된 멤브레인을 단백질 면이 위로 향하게 필름 카세트에 넣으십시오. X선 필름 노출에 

적합한 조명(예: 빨간색 안전등)을 제외하고 모든 조명을 끄십시오.

Note: Film must remain dry during exposure. For optimal results, perform the following precautions:

참고: 필름은 노출 중에 건조 상태를 유지해야 합니다. 최적의 결과를 얻으려면 다음 예방 조치를 수행하십시오:

• Make sure excess substrate is removed from the membrane and the membrane protector.

• 멤브레인과 멤브레인 보호대에서 과잉 기질을 제거했는지 확인하십시오

• Use gloves during the entire film-handling process.

• 전체 필름 처리 과정 동안 장갑을 착용하십시오.

• Never place a blot on developed film, as chemicals on the film may reduce signal.

• 개발된 필름 위에 블롯을 절대 올리지 마십시오. 필름의 화학물이 신호를 감소시킬 수 있습니다.

11. Carefully place X-ray film on top of the membrane. Perform a first-time exposure of 60 seconds. 

Vary the exposure time to achieve optimal results.  

11.멤브레인 위에 X선 필름을 신중히 올려놓으십시오. 첫 번째 노출은 60초 동안 수행하십시오. 

노출 시간을 다양하게 설정하여 최적의 결과를 얻으십시오

12. Develop film using appropriate developing solution and fixative. If signal is too intense, reduce 

exposure time or strip and re-probe the blot with decreased antibody concentrations.  

12.적합한 현상액 및 고정액을 사용하여 필름을 현상하십시오. 신호가 너무 강하면 노출 

시간을 줄이거나 블롯을 제거하고 항체 농도를 감소시켜 다시 탐침하십시오

Storage:Upon receipt store at room temperature.

보관: 수령 후 실온에서 보관하십시오.

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